GB/T15038-2005 葡萄酒、果酒通用分析方法四
作者： 新闻来源： 点击数： 更新时间：2007-10-8 19:51:00
- 附录A
（规范性附录）
酒精水溶液密度与酒精度（乙醇含量）对照表（略）
附录B
（规范性附录）
酒精计温度、酒精度（乙醇含量）换算表（略）
附录C
（规范性附录）
密度－总浸出物含量对照表（略）
附录D
（资料性附录）
葡萄酒中的糖分和有机酸的测定（HPLC法）
D.1 原理
一定量的葡萄酒样品经阴离子固相萃取柱分离与纯化，将酒样中的糖、醇和有机酸分离。分别在 Polyspher○OA KC色谱分离柱中，以稀的硫酸溶液为流动相，再经示差折光和紫外检测器检测，分别对蔗糖、葡萄糖、果糖、甘油等糖醇和柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、醋酸等有机酸定量。
D.2 试剂和材料
D.2.1 甲醇 （色谱纯）
D.2.2 浓硫酸
D.2.3 氨水
D.2.4 氢氧化钠
D.2.5 标准物质
D.2.5.1 柠檬酸
D.2.5.2 酒石酸
D.2.5.3 D-苹果酸
D.2.5.4 琥珀酸
D.2.5.5 乳酸
D.2.5.6 醋酸
D.2.5.7 蔗糖
D.2.5.8 葡萄糖
D.2.5.9 D-果糖
D.2.5.10 甘油
D.2.6 超纯水（实验室制备）
D.2.7 糖、醇标准储备溶液：分别称取蔗糖、葡萄糖、果糖标准品各0.05g，精确至0.0001g，用超纯水定容至50mL，该溶液分别含蔗糖、葡萄糖、果糖1g/L，称取甘油标准品0.20g，精确至0.0001g。
D.2.8 糖、醇标准系列溶液：将各糖、醇标准储备溶液用水稀释成含糖浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80g/L和含甘油浓度为0.20、0.40、0.80、1.60、3.20g/L的混合标准系列溶液。
D.2.9 有机酸标准储备溶液：分别称取柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、醋酸各0.05g，精确至0.0001g，定容至50mL，该溶液分别含柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、醋酸各1g/ L。
D.2.10 有机酸标准系列溶液：将各有机酸标准储备溶液用水稀释成浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80g/L的混合标准系列溶液。
D.2.11 1%硫酸溶液：2mL浓硫酸加198mL重蒸水。
D.2.12 1%氨水溶液：2mL氨水加198mL重蒸水。
D.2.13 1.5mol/L 硫酸溶液：吸取1％硫酸溶液4.35mL，用重蒸水定容至100 mL。
D.2.14 0.0015mol/L 硫酸溶液：准确吸取1mL1.5 mol/L硫酸溶液，用重蒸水定容至1000 mL。
D.2.15 0.0075mol/L 硫酸溶液：吸取1.5mol/L 硫酸溶液5mL，用重蒸水定容至1000 mL。
D.2.16 8% 氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠溶于50 mL水中。
D.3 仪器
D.3.1 高效液相色谱系统：配有紫外检测器和色谱柱恒温箱。
D.3.2 色谱分离柱：Fetigsaule RT 300-7,8 Polyspher@OA KC MERCK，PN：1.51270.0001或其它分析效果类似的色谱柱。
D.3.3 强阴离子交换固相萃取柱：SupelcleanTM LC-SAX SPE (3ml) PN：57017或其它分析效果类似的固相萃取柱。
D.3.4 固相萃取装置： ALLTECH PN：210351或其它分析效果类似的装置。
D.3.5 微量注射器：50或100μL。
D.3.6 流动相真空抽滤脱气装置及0.2μm或0.45μm微孔膜。
D.4 分析步骤
D.4.1 固相萃取柱的活化
将固相萃取柱插在固相萃取装置上，加入2-3 mL甲醇，以慢速度下滴（ 约4-6滴/min ）过柱，待即将滴完时，加2-3 mL纯水，继续慢速度下滴过柱，等快滴完时再加2-3 mL1％氨水，滴至液面高度为1mm左右关上控制阀，切勿滴干。
D.4.2上样
将收集糖、醇的10mL空容量瓶置于接取处，用微量移液枪准确吸取酒样2mL加入固相萃取柱中。
D.4.2.1 第一步洗脱-糖醇洗脱
以慢滴速度过柱，滴至液面高度为1mm左右时，继续用4mL纯水分两次以慢速度下滴洗脱，将洗脱液全部收取在10mL容量瓶中，取出容量瓶，用8% 氢氧化钠溶液调节洗脱液pH至6左右,再用水定容至10mL.洗脱液即作糖、醇分离样液。
D.4.2.2 第二步洗脱-有机酸的洗脱
将收集有机酸的10mL容量瓶置于接取处，用4mL1%硫酸溶液分两次继续以慢速度下滴洗脱，最后抽干柱中洗脱溶液, 取出容量瓶，用8%氢氧化钠调节PH至6左右,再用纯水定容至10mL。洗脱液即作有机酸分离样液。
D.4.2.3 样品测定：
D.4.2.3.1 糖、醇的测定：
色谱条件
色谱柱：Fetigsaule RT 300-7,8 Polyspher@OA KC MERCK，PN：1.51270.0001或其它分析效果类似的色谱柱。
柱温：30℃
流动相：0.0015mol/L硫酸溶液
流速：0.3mL/min
进样量：20μL。
在测定前装上色谱柱，调柱温至30℃，以0.3mL/min的流速通入流动相平衡。待系统稳定后按上述色谱条件依次进样。
将糖、醇混合标准液系列溶液分别进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线。线性相关系数应为0.9990以上。
将制备好的样品溶液进样（样品中糖、醇的含量应控制在标准系列范围内）。根据保留时间定性，根据峰面积，以外标法定量。
D.4.2.3.2 有机酸的测定：
色谱条件
色谱柱：Fetigsaule RT 300-7,8 Polyspher@OA KC MERCK，PN：1.51270.0001或其它分析效果类似的色谱柱。
柱温：55℃
流动相：0.0075mol/L硫酸溶液
流速：0.3mL/min
检测波长：210nm
进样量：20μL。
在测定前装上色谱柱，调柱温至55℃，以0.3mL/min的流速通入流动相平衡。待系统稳定后按上述色谱条件依次进样。
将有机酸标准系列溶液分别进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线。线性相关系数应为0.9990以上。
将制备好的样品溶液进样（样品中有机酸的含量应控制在标准系列范围内）。根据保留时间定性，根据峰面积，查标准曲线定量。
D.5 结果计算
Xi = Ci * F……………………………………（D.1）
式中： Xi——样品中各组分的含量，g／L；
Ci——从标准曲线求得样品溶液中各组分的含量，g／L；
F——样品的稀释倍数。
计算结果保留一位小数。
D.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％ 。
附录E
（资料性附录）
葡萄酒中白藜芦醇的测定
E.1 HPLC法
E.1.1 原理
葡萄酒中白藜芦醇经过乙酸乙酯提取，Cle-4型柱净化，然后用HPLC法测定。
E.1.2试剂和材料
E.1.2.1 无水乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、甲苯、氯化钠：均为分析纯。
E.1.2.2 乙腈：色谱纯。
E.1.2.3 反式白藜芦醇（Trans-Resveratrol）：Sigma 公司。
E.1.2.4 反式白藜芦醇标准储备溶液（1.0mg/mL）：称取10.0mg 反式白藜芦醇于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用。
E.1.2.5 反式白藜芦醇标准系列溶液：将反式白藜芦醇标准储备溶液用甲醇稀释成1.0μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL标准系列溶液。
E.1.2.6 顺式白藜芦醇：将反式白藜芦醇标准储备溶液在254nm波长下照射30min，然后按本方法测定反式白藜芦醇含量，同时计算转化率，得顺式白藜芦醇含量，按反式白藜芦醇配制方法配制顺式白藜芦醇标准系列溶液。
E.1.3 仪器
E.1.3.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器；
E.1.3.2 旋转蒸发仪；
E.1.3.3 色谱柱 ODS-C18；
E.1.3.4 Cle-4型净化柱（1.0g/5mL），或等效净化柱。
E.1.4 试样的处理
E.1.4.1 葡萄酒中白藜芦醇的提取：取20.0 mL葡萄酒，加2.0g氯化钠溶解后，再加20.0mL乙酸乙酯振荡萃取，分出有机相过无水硫酸钠，重复一次，在50℃水浴中真空蒸发，氮气吹干。加2.0 mL乙醇溶解剩余物，移到试管中。
E.1.4.2 先用5mL乙酸乙酯淋洗Cle-4型净化柱，然后加样（E.1.4.1）2mL，接着用5mL乙酸乙酯淋洗除杂，然后用10mL95%乙醇洗脱收集，氮气吹干。加5mL流动相溶解。
E.1.5 HPLC法分析样品
色谱条件
色谱柱：ODS-C18柱，4.6×250mm,5µm。
柱温：室温
流动相：乙腈:重蒸水=30:70
流速：1.0mL/min
检测波长：306nm
进样量：20μL。
在测定前装上色谱柱，以1.0mL/min的流速通入流动相平衡。待系统稳定后按上述色谱条件依次进样。
用顺、反式白藜芦醇标准系列溶液分别进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线。线性相关系数应为0.9990以上。
将制备好的样品（E.1.4.2）进样（样品中的白藜芦醇含量应在标准系列范围内）。根据标准品的保留时间定性样品中白藜芦醇的色谱峰。根据样品的峰面积，以外标法计算白藜芦醇的含量。
E.1.6 结果计算
Xi = Ci * F……………………………………（E.1）
式中： Xi——样品中白藜芦醇的含量，g／L；
Ci——从标准曲线求得样品溶液中白藜芦醇的含量，g／L；
F——样品的稀释倍数。
计算结果保留一位小数。
注：总的白藜芦醇含量为顺式、反式白藜芦醇之和。
E.1.7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％ 。
E.2 GC-MS法
E.2.1 原理
葡萄酒中白藜芦醇经过乙酸乙酯提取，Cle-4型柱净化，然后用BSTFA+1%（φ）TMCS衍生后，采用GC—MS进行定性、定量分析，定量离子为444。
E.2.2 试剂和材料
E.2.2.1 BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+1%（φ）TMCS （三甲基氯硅烷）
其它同E.1.2 。
E.2.3 仪器
E.2.3.1 色质联用仪
E.2.3.2 旋转蒸发仪
E.2.3.3.色谱柱：HP—5 MS 5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)
E.2.3.4 Cle-4型净化柱（1.0g/5mL），或等效净化柱。
E.2.4试样的处理
E.2.4.1葡萄酒中白藜芦醇的提取：取20.0 mL葡萄酒，加2.0g氯化钠溶解后，再加20.0mL乙酸乙酯振荡萃取，分出有机相过无水硫酸钠，重复一次，在50℃水浴中真空蒸发，氮气吹干。
E.2.4.2 衍生化：将E2.4.1处理的样品加0.1 mL BSTFA+1%TMCS，加盖瓶于旋涡混合器上震荡，在80℃下加热0.5 h，氮气吹干，加1.0mL甲苯溶解。
E.2.4.2 取适量的白藜芦醇标准溶液，氮气吹干，按E2.4.2进行衍生化。
E.2.5 GC-MS法测定
质谱条件：
——柱温程序：初温150℃，保持3 min，然后以10℃／min升至280℃，保持10min；
——进样口温度：300℃
——载气为高纯氦气（99.999%），流速0.9mL/min，
——分流比：20：1
—— EI源源温 230℃
—— 电子能量70eV
—— 接口温度280℃
——电子倍增器电压1765V
——质量扫描范围（Scan mode m/z）35～450amu,
—— 定量离子444；
——溶剂延迟：5 min
——进样量1.0μL
E.2.6 结果计算
同E.1.6 。
E.2.7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％ 。
附录F
（资料性附录）
葡萄酒、山葡萄酒感官评定要求
F.1 基本要求
F.1.1环境的要求
F.1.1.1品尝室的要求
——应有适宜的光线，使人感觉舒适。
——应便于清扫，且离噪声源较远，最好是隔音的。
——无任何气味，并便于通风与排气。
F.1.1.2 光源
品尝室的光源可用自然日光或日光灯，但光线应为均匀的散射光。
F.1.1.3 温度与湿度
品尝室内，应保持使人舒适的、稳定的温度和湿度，温度和湿度应分别保持在20℃～22℃和60%～70%之间。
F.1.1.4 品尝间
品尝间应相互隔离，内部设施应便于清洗，便于比较葡萄酒的颜色；应有可饮用的自来水龙头，自来水的龙头最好是脚踏式的，以便于品尝员的双手工作。
F.1.2品尝杯的要求
应采用葡萄酒标准品尝杯。标准杯由无色透明的含铅量为9%左右的结晶玻璃制成，不应有任何印痕和气泡；杯口应平滑、一致，且为圆边；品尝杯应能承受0℃～100℃的温度变化，其容量为210～225ml。
F.1.3 人员要求
必须由取得相应资质（应届国家评酒员）的人员进行品评，一般掌握单数，人员尽可能多，最少不得低于7人。
F.1.4 样品的处理
将样品放置于20℃±2℃环境下平衡24h（或20℃±2℃水浴中保温1h）后，采取密码标记后进行感官品评。
注：被评样品的相关信息应对评酒员严格保密。
F.1.5 计分方法
每个评酒员按细则要求在给定分数内逐项打分后，累计出总分，再把所有参加打分的评酒员分数累加，取其平均值，即为该酒的感官分数。
F.2 评分标准用语
见表F.1。
F.3 葡萄酒评分细则
见表F.2。
F.4 山葡萄酒评分细则
见表F.3。
表F.1 评分标准用语
|
分 数 段 |
特 点 | |
|
葡萄酒 |
山葡萄酒 | |
|
90分 以上 |
85分 以上 |
具有该产品应有的色泽，悦目协调、澄清（透明）、有光泽；果香、酒香浓馥幽雅，协调悦人；酒体丰满，有新鲜感，醇厚协调，舒服，爽口，回味绵延；风格独特，优雅无缺。 |
|
89-80分 |
84-75 分 |
具有该产品的色泽；澄清透明，无明显悬浮物，果香、酒香良好，尚悦怡；酒质柔顺，柔和爽口，甜酸适当；典型明确，风格良好。 |
|
79-70分 |
74-65 分 |
与该产品应有的色泽略有不同，澄清，无夹杂物；果香、酒香较少，但无异香；酒体协调，纯正无杂；有典型性，不够怡雅。 |
|
69-65分 |
64-60 分 |
与该产品应有的色泽明显不符，微浑，失光或人工着色；果香不足，或不悦人，或有异香；酒体寡淡、不协调，或有其他明显的缺陷。 （除色泽外，只要有其中一条，则判为不合格品。） |
|
64-55分 |
59-50 分 |
不具备应有的特征。 |
表F.2 葡萄酒评分细则
|
项 目 |
要 求 | |||
|
外
观
10分 |
色 泽
5分 |
白葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
近似无色，浅黄色，禾杆黄，绿禾杆黄色，金黄色，琥珀黄色 | |
|
红葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
紫红，深红，宝石红，鲜红，瓦红，砖红，黄红，棕红，黑红色 | |||
|
桃红葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
黄玫瑰红，橙玫瑰红，玫瑰红，橙红，浅红，紫玫瑰红色 | |||
|
5分 |
澄清 程度 |
澄清透明、有光泽、无明显悬浮物（使用软木塞封的酒允许有3个以下不大于1mm的木渣） | ||
|
起泡 程度 |
起泡葡萄酒注入杯中时，应有细微的串珠状气泡升起，并有一定的持续性，泡沫细腻、洁白。 | |||
|
香 气 30分 |
非加香葡萄酒 |
具有纯正、优雅、愉悦和谐的果香与酒香 |
|
加香葡萄酒 |
具有优美纯正的葡萄酒香与和谐的芳香植物香 | |
|
滋
味
40分 |
干、半干葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
酒体丰满，醇厚协调，舒服，爽口。 |
|
甜、半甜葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
酒体丰满，酸甜适口，柔细轻快。 | |
|
起泡葡萄酒 |
口味优美、醇正、和谐悦人，有杀口力 | |
|
加气起泡葡萄酒 |
口味清新、愉快、纯正，有杀口力 | |
|
典型性20分 |
典型完美、风格独特，优雅无缺 | |
表F.3 山葡萄酒评分细则
|
项 目 |
要 求 | ||
|
外
观 10分 |
色泽 5分 |
桃红葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
黄玫瑰红，橙玫瑰红，玫瑰红，橙红，浅红，紫玫瑰红色 |
|
红葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
紫红，深红，宝石红，鲜红，瓦红，砖红，黄红，棕红，黑红色 | ||
|
5分 |
澄清程度 |
澄清透明、无明显悬浮物。用软木塞封口的酒，允许有3个以下不大于1mm的软木渣 | |
|
起泡程度 |
山葡萄酒注入杯中时，应有洁白或微带红色的气泡 | ||
|
香气 30分 |
山葡萄酒 |
具有纯正、优雅、和谐的果香与酒香 | |
|
加香山葡萄酒 |
具有和谐的芳香植物香与山葡萄酒香 | ||
|
滋 味 40分 |
干、半干山葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
酒体丰满，醇厚协调，舒服，爽口 | |
|
甜、半甜山葡萄酒 （含加香葡萄酒） |
酒体丰满，酸甜适口，柔细轻快 | ||
|
山葡萄汽酒 |
口味优美、醇正、和谐悦人，有杀口力 | ||
|
典型性20分 |
典型完美、风格独特，优雅无缺 | ||
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